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    【微生物】正置培养霉菌污染原因分析

    放大字体  缩小字体 发布日期:2022-02-15  浏览次数:276
    核心提示:自GB 4789.15-2016 霉菌和酵母菌计数正式开始实施以来,正置培养容易造成环境污染,一直比较困扰大家,很多小伙伴们在后台跟小编反
     GB 4789.15-2016 霉菌和酵母菌计数正式开始实施以来,正置培养容易造成环境污染,一直比较困扰大家,很多小伙伴们在后台跟小编反应国标霉菌正置培养容易污染,今天小编就来为大家分析一下这个问题。

     

    GB 4789.15-2016相比GB 4789.15-2010,最大的区别可能就在于对平皿的培养方式。2016版的国标在5.2中要求:琼脂凝固后,正置平板,置28℃±1℃培养箱中培养,观察并记录培养至第5d的结果。


    其实针对这一条,需要注意两点:

    第一,是需要对平板进行观察的,不能直接培养至第5天计数,因为霉菌的特殊性,在培养过程中会产生大量孢子,导致整个平板蔓延。因此,在培养后的第2天开始,就要对平板进行观察,并计数典型菌落,而这样的观察在之后每一天都应该进行,直至培养第5天。

    第二,就是正置培养。这一点是16版国标与旧版最大的区别,10版之前的国标都是倒置培养的。而进行正置培养,很多朋友可能都会遇到平板被霉菌污染的问题,这怎么解决呢?


    污染原因与解决措施

    一、培养箱环境污染

    很多实验室培养霉菌采用的是专用的霉菌培养箱,所以培养箱空间里会有大量的霉菌孢子。而平皿的盖和底是有一定缝隙的,尤其是玻璃平皿缝隙还是比较大的,正置培养中,孢子会向上飞扬通过缝隙落到平板的培养基上,导致污染。细心地实验猿可能发现,污染的菌落大部分都是在平皿边缘生长的。用一次性塑料平皿来培养,污染的概率就会小很多,因为一次性塑料平皿的盖和底之间的缝隙相比之下是比较小的。因此培养箱环境中的孢子可能会是主要污染源。


    这样一来,解决的方法就应该是对培养箱进行杀菌。可以用75%酒精和新洁尔灭两种消毒剂对培养箱进行了全面的消毒,消毒完最好不要马上用,消毒完最好放个几天在使用。

    应该注意的是,这样的杀菌操作也是需要经常进行的,因为霉菌的孢子是十分难清除的,而每次培养可能又会引进新的污染源,可以考虑每周进行两次,保证培养环境无污染源。


    二、平皿冷凝水污染

    正置培养过程中,若是平皿的上盖有泠凝水,在培养过程中冷凝水滴落到培养基上,也极容易造成菌落蔓延,平皿污染。因此在培养之前,一定要保证平皿干燥,可以把平皿放在37℃的环境里烘干,烘干之后再进行培养,就会避免这个原因造成的污染。


    三、操作环境和培养基的污染

    因为无菌室里可能也会因为灭菌效果不理想造成污染。小编之前工作的实验室,操作台使用紫外线灭菌,经常就会灭菌不彻底有孢子污染,尤其是在进行过霉菌的相关检测之后。所以在进行过霉菌检测之后,适当的增长灭菌时间,可能会达到比较理想的效果。另外,为了彻底解决无菌室空间孢子污染的问题,可以购买安装臭氧发生器,通过紫外线+臭氧的双重消毒模式,效果就十分理想了。


    大家如果还是想验证一下究竟是什么原因造成的污染,这里提供一个简单的验证试验:在正常检测的环境中倒一组空白平皿,将这些平皿分为AB两组,其中A组用封口膜将平皿封好,B组不封,均放置在培养箱中正置培养。若是A组B组均有霉菌生长,则需要考虑培养基污染或者操作环境的污染;若是A组不生长霉菌而B组生长,则需要考虑是培养箱内的环境污染。通过这个小试验,可以基本上确定污染源,然后针对污染源进行相应的处理。

    编辑:songjiajie2010

     
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    关键词: 污染
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