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    厌氧菌的培养与初步鉴别

    放大字体  缩小字体 发布日期:2011-01-04  来源:互联网  浏览次数:8351
    核心提示:厌氧菌(anaerobicbacteria)是一类在无氧条件下比在有氧环境中生长好的细菌,而不能在空气(18%氧气)和(或)10%二氧化碳浓度下的固体培养基表面生长的细菌。这类细菌缺乏完整的代谢酶体系,其能量代谢以无氧发酵的方式进行。厌氧菌是人体正常菌群的组成部分,广泛存在于人体皮肤和腔道的深部黏膜表面,在组织缺血、坏死,或者需氧菌感染的情况下,导致局部组织的氧浓度降低,才发生厌氧菌感染。

    一、厌氧菌标本的送检方法与处理
        标本送到实验室后,应在20~30min内处理完毕,最迟不超过2h,以防止标本中兼性厌氧菌过度繁殖而抑制厌氧菌的生长。如不能及时接种,可将标本置室温保存(一般认为,冷藏对某些厌氧菌有害,而且在低温时氧的溶解度较高)。
    1)针筒运送:一般用无菌针筒抽取标本后,排尽空气,针头插入无菌橡皮塞,以隔绝空气,立即送检。这种方法多用于液体标本的运送,如血液、脓液、胸腹水、关节液等医.学教育网搜集整理。
    2)无菌小瓶运送:一般采用无菌的青霉素小瓶,瓶内加一定量的培养基和少量氧化还原指示剂,用橡皮盖加铝盖固定密封,排除瓶内空气,充以C02气体。同时先观察瓶内氧化还原指示剂的颜色,以判断瓶内是否为无氧环境,如合格将用无菌注射器将液体标本注入瓶中即可。
    3)棉拭子运送:一般不采用棉拭子运送,如果使用该方法,一定使用特制运送培养基,确保无氧环境,确保不被污染,确保快速送检。
    4)厌氧罐或厌氧袋运送:将厌氧罐或厌氧袋内装入可有效消耗氧气的物质,确保无氧环境。该方法一般用于运送较大的组织块或床边接种的培养皿等。

    二、厌氧菌的分离培养
        厌氧菌的分离培养主要分初代培养和次代培养两个阶段,其中初代培养相对比较困难,关键的问题就是厌氧环境和培养基的选择。初代培养的一般原则是:
    1)先将标本涂片染色直接镜检,指导培养基的选择。
    2)尽量选用在厌氧菌中覆盖面宽的非选择性培养基。
    3)最好多选1~2种覆盖面不同的选择性培养基。
    4)尽量保证培养基新鲜。
    5)要考虑到微需氧菌存在的可能。

    1.选用适当的培养基接种:应接种固体和液体两种培养基;
    (1)培养基的使用,应注意下列各点:
    1)尽量使用新鲜培养基,2~4h内用完;
    2)应使用预还原培养基,预还原24~48h更好;
    3)可采用预还原灭菌法制作的培养基(用前于培养基中加入还原剂,如L-半胱氨酸、硫乙醇酸钠、维生素C及葡萄糖等,尽可能使预还原剂处于还原状态);
    4)液体培养基应煮沸10min,以驱除溶解氧,并迅速冷却,立即接种;
    5)培养厌氧菌的培养基均应营养丰富,并加有还原剂与生长刺激因子(血清、维生素K、氯化血红素、聚山梨酯-80等)。

    (2)培养基的选择:初次培养一般都使用选择培养基和非选择培养基。
    1)非选择培养基:本培养基使分离的厌氧菌不被抑制,几乎能培养出所有的厌氧菌。常使用心脑浸液琼脂(BHI)、布氏琼脂(BR)、胰豆胨肝粉琼脂(GAM)、胰胨酵母琼脂(EG)、CDC厌氧血琼脂等。
    2)选择培养基:为有目的选择常见厌氧菌株,以便尽快确定厌氧的种类。

    2.每份标本至少接种3个血平板,分别置于有氧,无氧及5%~10à2环境中培养,以便正确地培养出病原菌,从而判断其为需氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌或厌氧菌中的哪一类。
     
    3.厌氧培养法
    (1)厌氧罐培养法。
    (2)气袋法。
    (3)气体喷射法:又称转管法。
    (4)厌氧手套箱培养法:是迄今厌氧菌培养的最佳仪器之一。
    (5)其他培养法:平板焦性没食子酸法;生物耗氧法;高层琼脂培养法。
     
    4.厌氧状态的指示:美蓝和刃天青。无氧时均呈白色,有氧时美蓝呈蓝色,刃天青呈粉红色。
     
     5.分离培养厌氧菌失败的原因:
    ①培养前未直接涂片和染色镜检;
    ②标本在空气中放置太久或接种的操作时间过长;
    ③未用新鲜配制的培养基;
    ④未用选择培养基;
    ⑤培养基未加必要的补充物质;
    ⑥初代培养应用了硫乙醇酸钠作为唯一厌氧菌培养基;
    ⑦无合适的厌氧罐或厌氧装置漏气;
    ⑧催化剂失活;
    ⑨培养时间不足;
    ⑩厌氧菌的鉴定材料有问题。

    三、厌氧菌直接镜检初步鉴别

         
    coccus,球菌;b:bacillus,杆菌。
     

    编辑:songjiajie2010

     
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